بررسی اثر آپوپتوتیکی پروتئین غیر ساختمانی nsp4 روتاویروس بر روی دو رده سلول سرطانی انسان

در این پایان نامه اثر آپوپتیکی پروتئین nsp4 مرتبط با استرس erبر روی دو رده سلول سرطانی انسان مورد بررسی قرار گرفت. ابتدا ژن nsp4 درون پلاسمید بیانی کلون شد. پلاسمید نوترکیب توسط لیپوفکتامین 2000 به درون سلول های مورد مطالعه ترانسفکت شد و سپس بیان پروتئین ر سلول ها با استفاده از وسترن بلات تائید گردید. به منظور بررسی اثر پروتئین nsp4 بر زیست پذیری، آپوپتوز و افزایش بیانchop و کاسپاز 4 که نشان دهنده آپوپتوز وابسته به استرس er هستند، از تست های mtt، فلوسیتومتری و وسترن بلات استفاده شد. همزمان اثر روتا ویروس گاوی در القاء اپوپتوز و افزایش بیانchop و کاسپاز 4 فعال شده در سلول ها نیز مطالعه شد. نتایج نشان داد که پروتئین nsp4 در هر دو رده سلول بیان شد. اثر سیتوتوکسیک و آپوپتوتیکی پروتئین nsp4 بر سلول ها نسبت به گروه های کنترل از نظر آماری معنی دار بود. به هر حال نتایج وسترن بلات نشان دادکه پلاسمید بیان کننده پروتئین nsp4 منجر به افزایش بیانchop و فعال شدن کاسپاز 4 نمی شود. جالب توجه است که روتاویروس علاوه بر القاء آپوپتوز در درصد بالایی از سلولها، افزایش بیانchop و فعال شدن کاسپاز 4 را نیز سبب شد.